摘 要 目的 观察纯化的蜂毒肽对兔免疫性关节炎的病理过程是否有抑制作用。方法 采用柱层析方法纯化粗制蜂毒，以除去具有溶血及化学刺激作用的杂质。纯化物经 CD 光谱法和荧光光谱法，高压液相色谱分析及氨基酸序列分析。造成家兔卵蛋白性关节炎模型，给予蜂毒肽肌肉注射，观察组织炎症反应的变化。并测定兔血红蛋白水平，进行了体外溶血实验。结果 高压液相色谱分析显示单峰， CD 光谱法和荧光光谱法、高压液相色谱分析氨基酸序列分析显示纯化物氨基酸序列与文献报道峰毒肽一致。实验组应用纯化蜂毒肽后，滑膜炎症明显减轻。溶血实验显示，纯化蜂毒肽只有较弱的溶血作用。结论 纯化蜂毒肽对兔免疫性关节炎具有良好的抗炎作用，并且溶血作用较弱。

     关键词 ：蜂毒肽；免疫性；骨关节炎；兔

     类风湿关节炎是一种常见疾患，病因尚不清楚，治疗比较困难。本研究采用天然蜂毒，经柱层析获得纯化蜂毒肽，实验证实纯化蜂毒肽对兔免疫性关节炎具有显著抑制作用。

    1 材料与方法

    1.1 动物模型

     1.1.1 动物：成年新西兰兔 20 只，编号。

    1.1.2 免疫用完全性佐剂的制备：采用家兔卵蛋白性关节炎模型 [1-4] 。取羊毛脂 5 ml+ 液体石蜡 10 ml(1 ∶ 2) ，加温至 70 ～ 80 ℃ ，磁力或震荡器混匀，成为不完全佐剂。取不完全佐剂 4 ml 加入旧结核菌素 2 ml ， 50 U/ml ，成为完全佐剂 6 ml ，磁力或震荡器混匀乳化，用前加入卵蛋白，成为 3% 卵蛋白溶液。

    1.2 致敏方法及分组

    1.2.1 首次刺激：在兔背部肩胛骨间选 5 个注射点，分别皮下注射完全佐剂 0.5 ml 致敏。

    1.2.2 再次刺激；致敏 28 d 后，于兔右膝关节内注入不完全佐剂 1.0 ml 。然后随机分为两组： A 组 ( 实验组 )10 只， B 组 ( 对照组 )10 只。分笼饲养，观察兔肢体活动情况，膝关节肿胀度 ( 卡钳测其宽度， mm) ，电子温度计测皮肤温度值 ( ℃ ) 。检查者不参加动物的分组和给药。统计学处理采用 t 检验。

    1.2.3 组织的处理：于 50 、 80 d 时各组处死 5 只取材，包括双侧膝关节、肌肉、关节囊、滑膜，以 4% 多聚甲醛固定， 10% EDTA 脱钙，切片， HE 染色，光镜下进行组织学检查。

    1.3 纯化蜂毒肽的制备

     粗提蜂毒适量溶于 HoAc/NaAc 缓冲液中，离心除去不溶性杂质，上清液经过 Sephaden G-50F 柱，流速 5 ml/h ，流动相为 HoAc/NaAc 缓冲液，收集流出液，再经 Sephaden G-15 柱脱盐后，冷冻干燥。干燥样品溶于 HoAc/NaAc 缓冲液，经过 Sephaden G-50F ，收集主峰位处流出液，经过 Sephaden G-50F 柱，脱盐后，冷冻干燥。

     纯化物经高压液相色谱分析，显示单峰。又经 CD 光谱法和荧光光谱法，高压液相色谱分析氨基酸序列分析，显示提取物氨基酸序列与文献 [3 ， 4] 报道蜂毒肽氨基酸序列一致。得蜂毒肽纯品。